IL-4Rα Plasmide Double Nickase (m): sc-421111-NIC

Il4ra codifica la catena alfa del recettore murino dell’interleuchina-4 (IL-4Rα), una subunità recettoriale condivisa da IL-4 e IL-13 che integra la trasduzione del segnale nell’immunità di tipo 2. Dopo il legame del ligando e la formazione del complesso recettoriale, IL-4Rα attiva le vie JAK/STAT, in particolare STAT6, regolando programmi trascrizionali che controllano la differenziazione dei linfociti, la polarizzazione dei macrofagi, le risposte epiteliali e il cambio di classe delle immunoglobuline. La segnalazione dipendente da IL-4Rα modella l’infiammazione allergica, l’iperreattività delle vie aeree e il rimodellamento fibrotico, ed è rilevante anche per la regolazione immunitaria nella difesa dell’ospite e per i fenotipi delle cellule mieloidi associate al tumore. Un’attività disregolata dell’asse IL-4/IL-13–IL-4Rα è stata implicata in modelli sperimentali di asma, dermatite e altre condizioni infiammatorie polarizzate verso Th2.

IL-4Rα Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Il4ra nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Il4ra. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Il4ra. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Il4ra interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.