IGFBP7 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-418272-ACT

IGFBP7 (insulin-like growth factor binding protein 7) è una proteina matricellulare secreta che modula la segnalazione di IGF/insulina legando gli IGF e interagendo con componenti della matrice extracellulare, influenzando così la disponibilità del ligando e l’ingaggio del recettore. Contribuisce alla regolazione dell’adesione cellulare, della senescenza e delle risposte allo stress, ed è stata associata alla biologia delle cellule endoteliali e della muscolatura liscia, inclusi i pathway che governano il rimodellamento vascolare e il turnover della matrice extracellulare. Variazioni nell’espressione di IGFBP7 sono frequentemente osservate in contesti di fibrosi, infiammazione e rimodellamento del microambiente tumorale, dove può influenzare proliferazione, migrazione e programmi angiogenici. Queste proprietà rendono IGFBP7 un bersaglio utile per studi meccanicistici sul crosstalk della segnalazione dei fattori di crescita e sui fenotipi guidati dalla ECM in sistemi cellulari umani.

IGFBP7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IGFBP7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IGFBP7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IGFBP7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IGFBP7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IGFBP7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IGFBP7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IGFBP7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IGFBP7 nelle cellule tumorali con espressione di IGFBP7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.