IGFBP3 Plasmide Double Nickase (h): sc-400682-NIC

La proteina 3 legante il fattore di crescita insulino-simile (IGFBP3) è un importante vettore secreto di IGF-I e IGF-II nel plasma umano che modula la biodisponibilità del ligando e la segnalazione tramite IGF1R, influenzando così l’attività delle vie PI3K–AKT e MAPK. Oltre al sequestro degli IGF, IGFBP3 può attivare processi indipendenti dagli IGF, tra cui la regolazione del ciclo cellulare, l’apoptosi, la senescenza e le risposte allo stress, attraverso interazioni con partner di superficie cellulare e nucleari. Alterazioni dell’espressione di IGFBP3 o della sua elaborazione proteolitica sono state associate a un controllo della crescita deregolato e a microambienti infiammatori, rendendola un bersaglio frequente nella ricerca in oncologia, metabolismo e rimodellamento tissutale. I suoi ruoli dipendenti dal contesto supportano studi sulla segnalazione endocrina/paracrina, sul dialogo con la matrice extracellulare e sui programmi trascrizionali che governano proliferazione e sopravvivenza.

IGFBP3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IGFBP3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IGFBP3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IGFBP3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IGFBP3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.