Plásmido Doble Nickase (h) IGFBP3: sc-400682-NIC

La proteína 3 de unión al factor de crecimiento similar a la insulina (IGFBP3) es un importante transportador secretado de IGF-I e IGF-II en el plasma humano que modula la biodisponibilidad del ligando y la señalización a través de IGF1R, influyendo así en la actividad de las vías PI3K–AKT y MAPK. Más allá del secuestro de IGF, IGFBP3 puede participar en procesos independientes de IGF, como la regulación del ciclo celular, la apoptosis, la senescencia y las respuestas al estrés, mediante interacciones con socios de la superficie celular y nucleares. La alteración de la expresión de IGFBP3 o de su procesamiento proteolítico se ha relacionado con un control del crecimiento desregulado y con microambientes inflamatorios, lo que la convierte en un objetivo frecuente en investigación en oncología, metabolismo y remodelación tisular. Sus funciones dependientes del contexto sustentan estudios sobre señalización endocrina/paracrina, el diálogo cruzado con la matriz extracelular y los programas transcripcionales que gobiernan la proliferación y la supervivencia.

IGFBP3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus IGFBP3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de IGFBP3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de IGFBP3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con IGFBP3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.