IGF2R/M6PR Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401697-ACT

IGF2R codifica il recettore per il mannosio-6-fosfato catione-indipendente (IGF2R/M6PR), un recettore multifunzionale di smistamento endosomiale che trasporta le idrolasi lisosomiali marcate con M6P dal Golgi verso endosomi e lisosomi, mediando al contempo la captazione e la rimozione di ligandi extracellulari. Legando il fattore di crescita insulino-simile 2 (IGF2) e regolando la disponibilità del ligando, IGF2R influenza le reti di segnalazione dei fattori di crescita e i programmi di proliferazione cellulare. IGF2R/M6PR partecipa alla biogenesi dei lisosomi, al riciclo endosoma-Golgi e ai percorsi di proteostasi che modellano il metabolismo e le risposte allo stress. La disregolazione o la perdita della funzione di IGF2R è stata associata ad alterazioni nel traffico degli enzimi lisosomiali e a una segnalazione aberrante di IGF2, contesti spesso esplorati nella biologia dei tumori, nella biologia dello sviluppo e nella ricerca sulle disfunzioni lisosomiali.

IGF2R/M6PR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IGF2R senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IGF2R/M6PR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IGF2R nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IGF2R, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IGF2R/M6PR. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IGF2R nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IGF2R/M6PR nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IGF2R/M6PR nelle cellule tumorali con espressione di IGF2R silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.