Plásmido CRISPR de Activación (h) IGF2R/M6PR: sc-401697-ACT

IGF2R codifica el receptor de manosa-6-fosfato independiente de cationes (IGF2R/M6PR), un receptor multifuncional de clasificación endosomal que transporta hidrolasas lisosomales marcadas con M6P desde el Golgi hacia endosomas y lisosomas, y que además media la captación y depuración de ligandos extracelulares. Al unirse al factor de crecimiento similar a la insulina 2 (IGF2) y regular la disponibilidad del ligando, IGF2R influye en las redes de señalización de factores de crecimiento y en programas de proliferación celular. IGF2R/M6PR participa en la biogénesis de lisosomas, el reciclaje de endosoma a Golgi y las vías de proteostasis que moldean el metabolismo y las respuestas al estrés. La desregulación o pérdida de la función de IGF2R se ha asociado con un tráfico alterado de enzimas lisosomales y una señalización anómala de IGF2, contextos que se investigan con frecuencia en biología del cáncer, biología del desarrollo y estudios sobre disfunción lisosomal.

IGF2R/M6PR El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IGF2R sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IGF2R/M6PR El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IGF2R en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IGF2R, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IGF2R/M6PR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IGF2R y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IGF2R/M6PR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IGF2R/M6PR en células tumorales con expresión de IGF2R silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.