IFRD1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421053

Panoramica

Ifrd1 (regolatore dello sviluppo correlato all’interferone 1; noto anche come Tis7/PC4) codifica un co-regolatore trascrizionale che modula programmi di espressione genica che controllano la differenziazione cellulare, la proliferazione e le risposte allo stress. IFRD1 interagisce con complessi associati alla cromatina e può influenzare la segnalazione infiammatoria, le vie miogeniche e di neurosviluppo, nonché gli output trascrizionali legati alla funzione delle cellule immunitarie. Nei modelli murini, un’alterata attività di Ifrd1 è stata associata a cambiamenti nelle risposte effettrici dei neutrofili e in fenotipi di riparazione tissutale, a supporto della sua rilevanza negli studi su infiammazione e processi degenerativi. Poiché IFRD1 influenza reti trascrizionali dipendenti dal contesto, viene spesso studiato nei meccanismi di impegno di linea, rigenerazione e biologia della risposta dell’ospite.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IFRD1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ifrd1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ifrd1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ifrd1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IFRD1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ifrd1 per lo studio della segnalazione di IFRD1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ifrd1 critici per la funzione di IFRD1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ifrd1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IFRD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal IFRD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ifrd1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IFRD1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR IFRD1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ifrd1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ifrd1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.