IFIT1 Plasmide Double Nickase (m): sc-421035-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IFIT1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il IFIT1 Double Nickase Plasmid (m) e il IFIT1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ifit1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IFIT1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-421035-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IFIT1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-421035-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La proteina indotta dall’interferone con ripetizioni tetratricopeptidiche 1 (IFIT1), codificata dal gene murino Ifit1, è un importante effettore stimolato dall’interferone che limita la replicazione virale riconoscendo caratteristiche dell’RNA “non self”, come un cap non corretto o RNA con 5′-trifosfato, e riducendo l’avvio della traduzione. IFIT1 agisce nell’ambito della segnalazione immunitaria innata a valle dell’interferone di tipo I e delle vie dei recettori di riconoscimento del patogeno, incluse le risposte antivirali mediate dai recettori tipo RIG-I e dai TLR, contribuendo a modellare il panorama trascrizionale e traduzionale durante infezione e infiammazione. Alterazioni dell’espressione di Ifit1 e dell’attività della famiglia IFIT sono state associate a firme interferoniche disregolate, alla suscettibilità dell’ospite ai patogeni virali e a patologie immuno-mediate, rendendolo un nodo utile per analizzare programmi genici dipendenti dall’interferone in modelli murini. I ricercatori studiano comunemente IFIT1 in contesti quali risposte allo stress guidate da citochine, attivazione di macrofagi e cellule dendritiche e modulazione della presentazione dell’antigene e del cross-talk tra cellule immunitarie.
IFIT1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ifit1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ifit1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ifit1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ifit1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.