IFI-35 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406072-ACT

Il gene umano **IFI35** codifica **IFI-35**, una proteina indotta dagli interferoni che modula la segnalazione immunitaria innata e i programmi di difesa antivirale a valle degli interferoni di tipo I. IFI-35 è associata alla regolazione degli output trascrizionali infiammatori, incluse vie che convergono sull’espressione di ISG guidata da **JAK/STAT** e l’interazione (“cross-talk”) con la segnalazione dei recettori di riconoscimento dei pattern. Un’espressione alterata di IFI35 è stata osservata in contesti di infiammazione cronica, risposte all’infezione virale e fenotipi immunitari associati ai tumori, dove può influenzare le reti citochiniche e le interazioni tra cellule immunitarie. Di conseguenza, IFI35 è spesso studiato come un nodo che collega le risposte agli interferoni a cambiamenti dello stato cellulare, come l’adattamento allo stress e il controllo della crescita mediato dal sistema immunitario.

IFI-35 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IFI35 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IFI-35 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IFI35 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IFI35, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IFI-35. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IFI35 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IFI-35 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IFI-35 nelle cellule tumorali con espressione di IFI35 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.