Plásmido CRISPR de Activación (h) HYAL4: sc-409245-ACT

El HYAL4 humano codifica una enzima de la familia de las hialuronidasas implicada en el recambio de los glucosaminoglucanos de la matriz extracelular, influyendo en la remodelación de microambientes ricos en hialuronano. Al modular la composición de la matriz pericelular, HYAL4 puede afectar las interacciones célula–matriz, la migración y las salidas de señalización vinculadas a la adhesión y las respuestas inflamatorias. Las alteraciones del metabolismo del hialuronano se han asociado con fibrosis tisular, la dinámica tumor–estroma y el tráfico de células inmunitarias, lo que convierte a la expresión de HYAL4 en una variable relevante en modelos de enfermedad. Estudiar la regulación y la función de HYAL4 ayuda a aclarar cómo el catabolismo de glicanos se integra con la homeostasis de la matriz extracelular y el comportamiento celular.

HYAL4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HYAL4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HYAL4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HYAL4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HYAL4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HYAL4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HYAL4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HYAL4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HYAL4 en células tumorales con expresión de HYAL4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.