HuD Plasmide Double Nickase (h): sc-400132-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HuD Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HuD Double Nickase Plasmid (h) e il HuD Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ELAVL4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HuD Antibody (H-9): sc-48421
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HuD Plasmide Double Nickase (h) | sc-400132-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HuD Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400132-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ELAVL4 codifica HuD, una proteina legante l’RNA arricchita nei neuroni della famiglia ELAV/Hu, che riconosce elementi ricchi di AU per regolare la stabilità dell’mRNA, lo splicing alternativo e la traduzione. HuD coordina programmi di controllo genico post-trascrizionale che sostengono la differenziazione neuronale, la crescita assonale, la plasticità sinaptica e il rimodellamento dipendente dall’attività, integrandosi con la dinamica dei granuli di stress e con il trasporto dell’RNA nei neuriti. Un’alterazione della funzione e dell’espressione di ELAVL4/HuD è stata associata a cambiamenti nella maturazione neuronale e nel metabolismo dell’RNA in contesti neuroevolutivi e neurodegenerativi; inoltre, ELAVL4 è utilizzato come marcatore di linea neuronale nella biologia dei tumori cerebrali e nelle sindromi neurologiche paraneoplastiche. Queste caratteristiche rendono ELAVL4 un nodo utile per studiare i reguloni neuronali dell’RNA, la selezione delle isoforme trascrittomiche e il rimodellamento delle reti proteina–RNA.
HuD Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ELAVL4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ELAVL4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ELAVL4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ELAVL4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.