HSP 60 Plasmide Double Nickase (h): sc-400336-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HSP 60 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HSP 60 Double Nickase Plasmid (h) e il HSP 60 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HSPD1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HSP 60 Antibody (LK1): sc-59567
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HSP 60 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400336-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HSP 60 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400336-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSPD1 codifica lo chaperonina mitocondriale HSP60 (HSPD1), un componente centrale del sistema delle chaperonine che supporta il ripiegamento e l’assemblaggio, dipendenti dall’ATP, delle proteine mitocondriali importate. Mantenendo la proteostasi nella matrice mitocondriale, HSP60 influenza la fosforilazione ossidativa, la biogenesi mitocondriale e le risposte cellulari allo stress, e può modulare la segnalazione della risposta mitocondriale alle proteine mal ripiegate (mitochondrial unfolded protein response, UPRmt). Alterazioni di HSPD1 influenzano il metabolismo mitocondriale, la gestione delle specie reattive dell’ossigeno (ROS) e le vie correlate all’apoptosi, collegando cambiamenti nella funzione o nell’espressione di HSP60 alla neurodegenerazione, a fenotipi infiammatori e al rimodellamento metabolico associato al cancro. In quanto chaperone altamente conservato, HSP60 è rilevante anche per lo studio del controllo qualità mitocondriale e dello stress proteotossico in diversi contesti sperimentali.
HSP 60 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HSPD1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HSPD1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HSPD1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HSPD1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.