HS3ST2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409766

Panoramica

HS3ST2 codifica per l’enzima eparan solfato–glucosamina 3-O-sulfotransferasi 2, localizzato nell’apparato di Golgi, che catalizza la 3-O-solfatazione delle catene di eparan solfato, generando rari motivi di solfatazione che modulano il legame dei ligandi e la specificità della segnalazione. Modellando le interazioni tra eparan solfato e proteine, HS3ST2 influenza la biologia della matrice extracellulare e regola vie quali FGF, WNT, VEGF e la segnalazione mediata da chemochine, che controllano adesione cellulare, migrazione e patterning tissutale. Un’alterata espressione di HS3ST2 o il suo silenziamento epigenetico sono stati riportati in molteplici contesti tumorali e vengono studiati in relazione a invasione, rimodellamento del microambiente associato alla metastasi e risposta deregolata ai fattori di crescita. Il suo ruolo nella biosintesi dell’eparan solfato lo collega anche a questioni più ampie della biologia dello sviluppo e dell’infiammazione, in cui i pattern di solfatazione modulano l’attivazione dei recettori e la formazione di gradienti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HS3ST2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HS3ST2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HS3ST2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HS3ST2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HS3ST2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HS3ST2 per lo studio della segnalazione di HS3ST2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HS3ST2 critici per la funzione di HS3ST2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HS3ST2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HS3ST2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HS3ST2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HS3ST2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HS3ST2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HS3ST2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HS3ST2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HS3ST2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.