Plásmido CRISPR de Activación (h) HoxD10: sc-403328-ACT

HOXD10 codifica el factor de transcripción homeobox HoxD10, un regulador clave del patrón anteroposterior y de la morfogénesis de las extremidades, que ayuda a establecer la identidad celular mediante la unión al ADN específica de secuencia y el control transcripcional. En tejidos diferenciados, HOXD10 contribuye a programas que gobiernan la migración y la adhesión celular, así como la remodelación de la matriz extracelular, interactuando con redes transcripcionales del desarrollo y vías de señalización que determinan el compromiso de linaje. La alteración de la expresión de HOXD10 o la disrupción de su regulación se ha asociado con fenotipos oncogénicos, incluidos cambios en la invasividad y el potencial metastásico, lo que refleja su papel en el control de conjuntos de genes vinculados a la dinámica epitelio-mesenquimal. Como regulador del desarrollo con actividad dependiente del contexto, HOXD10 se utiliza con frecuencia para estudiar los circuitos transcripcionales, la regulación de la cromatina y estados de expresión génica relevantes para la enfermedad en modelos celulares humanos.

HoxD10 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HOXD10 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HoxD10 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HOXD10 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HOXD10, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HoxD10. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HOXD10 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HoxD10 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HoxD10 en células tumorales con expresión de HOXD10 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.