HoxB2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404533-ACT

HOXB2 codifica il fattore di trascrizione homeobox HoxB2, un regolatore legante il DNA che contribuisce a stabilire la patterning antero‑posteriore e l’identità segmentale durante lo sviluppo embrionale, in particolare nel rombencefalo e nei lignaggi derivati dalla cresta neurale. HoxB2 modula programmi di espressione genica che controllano la specificazione del destino cellulare, la differenziazione e la risposta ai morfogeni attraverso reti trascrizionali HOX e interazioni con cofattori quali PBX e MEIS. Un’espressione deregolata di HOXB2 è stata associata ad alterazioni della segnalazione dello sviluppo e a stati trascrizionali aberranti in contesti patologici umani, inclusi i tumori, in cui i programmi genici HOX possono influenzare proliferazione, migrazione e plasticità di lignaggio. In quanto regolatore trascrizionale, HoxB2 rappresenta un nodo accessibile per interrogare i circuiti di regolazione genica e la riattivazione di vie di sviluppo in sistemi modello.

HoxB2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HOXB2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HoxB2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HOXB2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HOXB2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HoxB2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HOXB2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HoxB2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HoxB2 nelle cellule tumorali con espressione di HOXB2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.