HoxA11 Plasmide Double Nickase (h): sc-405264-NIC

HOXA11 codifica il fattore di trascrizione homeobox HoxA11, un regolatore legante il DNA che contribuisce alla definizione dell’asse antero-posteriore e a programmi di differenziamento specifici di tessuto durante lo sviluppo. Nei contesti adulti, HOXA11 influenza reti trascrizionali che coordinano decisioni di destino cellulare, rimodellamento della matrice extracellulare ed espressione genica responsiva agli ormoni, in particolare nei tessuti mesenchimali e riproduttivi. Un’espressione deregolata di HOXA11 o un controllo regolatorio alterato sono stati associati ad anomalie dello sviluppo e sono stati investigati in ambito oncologico e nei disturbi riproduttivi, in cui sono implicati programmi trascrizionali aberranti e l’identità di linea cellulare. In quanto regolatore trascrizionale a specificità di sequenza, HoxA11 è spesso studiato per mappare le interazioni enhancer–promoter e definire le reti di geni a valle che modellano l’architettura e la funzione dei tessuti.

HoxA11 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HOXA11 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HOXA11. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HOXA11. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HOXA11 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.