hnRNP E2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402274-ACT

PCBP2 codifica la ribonucleoproteina nucleare eterogenea E2 (hnRNP E2), una proteina legante l’RNA che riconosce elementi ricchi in citosina (C) per coordinare la regolazione genica post-trascrizionale. hnRNP E2 influenza lo splicing dell’mRNA, la stabilità, la poliadenilazione e la traduzione, plasmando così la produzione proteica in risposta a segnali cellulari e a condizioni di stress. Contribuisce all’assemblaggio di complessi ribonucleoproteici e interagisce con reti che controllano il metabolismo dell’RNA e l’inizio della traduzione. Un’attività disregolata di PCBP2/hnRNP E2 è stata associata a programmi di espressione genica alterati in ambito oncologico, all’utilizzo dell’RNA virale e a contesti di segnalazione infiammatoria, rendendone rilevante lo studio nei meccanismi di regolazione genica e di controllo dello stato cellulare.

hnRNP E2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PCBP2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

hnRNP E2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PCBP2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PCBP2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di hnRNP E2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PCBP2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da hnRNP E2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via hnRNP E2 nelle cellule tumorali con espressione di PCBP2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.