hnRNP E1 Plasmide Double Nickase (m): sc-423930-NIC

Il gene murino *Pcbp1* codifica la proteina nucleare eterogenea legante l’RNA E1 (hnRNP E1), una proteina legante l’RNA che riconosce motivi poli(C) per controllare la stabilità dell’mRNA, la traduzione e la processazione alternativa. hnRNP E1 partecipa a reti di regolazione post-trascrizionale che modellano la progressione del ciclo cellulare, i programmi di differenziamento e l’espressione genica in risposta allo stress, e può collegare la regolazione dell’RNA al rimodellamento dell’output genico dipendente dai segnali. Attraverso i suoi ruoli nell’assemblaggio di complessi ribonucleoproteici e nel controllo della traduzione, hnRNP E1 influenza vie associate alla plasticità epiteliale e alla dinamica del citoscheletro. Un’alterata attività di PCBP1/hnRNP E1 è stata associata a una disregolazione del metabolismo dell’RNA in contesti legati al cancro e in altri disturbi in cui la fedeltà della processazione dell’RNA è critica.

hnRNP E1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Pcbp1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Pcbp1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Pcbp1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Pcbp1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.