hnRNP C1/C2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420894

Panoramica

Hnrnpc codifica per la ribonucleoproteina nucleare eterogenea C1/C2 (hnRNP C1/C2), abbondanti proteine nucleari leganti l’RNA che si assemblano sui pre-mRNA per impacchettare i trascritti nascenti e determinarne il destino. hnRNP C partecipa alla scelta co-trascrizionale dei siti di splicing, alla maturazione dell’estremità 3′ degli mRNA e alle decisioni di ritenzione/esportazione nucleare, e contribuisce a mantenere l’integrità del trascrittoma contrastando l’inappropriata “esonizzazione” di Alu e altri eventi di splicing criptico. Attraverso queste funzioni, Hnrnpc si integra con le principali vie del metabolismo dell’RNA e influenza programmi di espressione genica legati a proliferazione, differenziamento e risposte allo stress cellulare. La deregolazione di hnRNP C è stata associata in letteratura a paesaggi di splicing alterati osservati in modelli rilevanti per cancro e neurodegenerazione, rendendolo un nodo comune per lo studio dei difetti di processamento dell’RNA.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO hnRNP C1/C2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hnrnpc in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hnrnpc insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hnrnpc a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina hnRNP C1/C2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hnrnpc per lo studio della segnalazione di hnRNP C1/C2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Hnrnpc critici per la funzione di hnRNP C1/C2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hnrnpc per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal hnRNP C1/C2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal hnRNP C1/C2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hnrnpc. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal hnRNP C1/C2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR hnRNP C1/C2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hnrnpc per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hnrnpc definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.