Plásmido CRISPR de Activación (m) HNF-4α: sc-420892-ACT

Hnf4a codifica el factor nuclear de hepatocitos 4 alfa (HNF-4α), un factor de transcripción receptor nuclear regulado por ligando que coordina programas génicos epiteliales y metabólicos en el hígado, el intestino, el páncreas y el riñón. HNF-4α se une a elementos de respuesta específicos del ADN para regular redes que controlan la homeostasis de lípidos y glucosa, el metabolismo de los ácidos biliares, la desintoxicación de xenobióticos y la diferenciación epitelial, integrándose con vías que incluyen la señalización de PPAR y circuitos de maduración de hepatocitos. En modelos murinos, la alteración de la actividad de Hnf4a se asocia con disfunción hepática, deterioro de la barrera intestinal y de los programas de absorción, y una desregulación metabólica más amplia, lo que lo convierte en un nodo central para estudios sobre la identidad tisular y el control homeostático.

HNF-4α El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Hnf4a sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HNF-4α El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Hnf4a en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Hnf4a, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HNF-4α. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Hnf4a y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HNF-4α en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HNF-4α en células tumorales con expresión de Hnf4a silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.