HNF-4α Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-420892-ACT

Hnf4a codifica il fattore nucleare epatocitario 4 alfa (HNF-4α), un fattore di trascrizione appartenente alla famiglia dei recettori nucleari, regolato da ligandi, che coordina programmi genici epiteliali e metabolici in fegato, intestino, pancreas e rene. HNF-4α si lega a specifici elementi di risposta nel DNA per regolare reti che controllano l’omeostasi di lipidi e glucosio, il metabolismo degli acidi biliari, la detossificazione di xenobiotici e la differenziazione epiteliale, integrandosi con vie che includono la segnalazione PPAR e circuiti di maturazione degli epatociti. Nei modelli murini, un’alterata attività di Hnf4a è associata a disfunzione epatica, compromissione della barriera intestinale e dei programmi di assorbimento, e a una più ampia disregolazione metabolica, rendendolo un nodo centrale negli studi sull’identità tissutale e sul controllo dell’omeostasi.

HNF-4α Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Hnf4a senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HNF-4α Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Hnf4a nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Hnf4a, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HNF-4α. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Hnf4a nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HNF-4α nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HNF-4α nelle cellule tumorali con espressione di Hnf4a silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.