HLA-DRα Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401010-ACT

HLA-DRA codifica la catena HLA-DRα, un componente essenziale degli eterodimeri dell’MHC di classe II che presentano antigeni peptidici esogeni alle cellule T CD4+ e coordinano l’attivazione dell’immunità adattativa. HLA-DRα partecipa alle vie di processamento e presentazione dell’antigene, inclusi il traffico attraverso compartimenti endosomiali dipendente dalla catena invariante e il caricamento dei peptidi regolato da HLA-DM, contribuendo a modellare la selezione delle cellule T e le risposte immunitarie periferiche. Le variazioni nell’espressione o nella regolazione dell’MHC di classe II sono strettamente associate a disregolazione immunitaria e patologie infiammatorie, con forte rilevanza per l’autoimmunità e l’immunobiologia dei trapianti. L’alterata espressione di HLA-DR è inoltre ampiamente utilizzata come marcatore degli stati di attivazione delle cellule mieloidi e delle cellule B, supportando gli studi sulla differenziazione delle cellule immunitarie e sulle risposte alla segnalazione citochinica.

HLA-DRα Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HLA-DRA senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HLA-DRα Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HLA-DRA nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HLA-DRA, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HLA-DRα. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HLA-DRA nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HLA-DRα nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HLA-DRα nelle cellule tumorali con espressione di HLA-DRA silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.