Plásmido CRISPR de Activación (h) HLA-DRα: sc-401010-ACT

HLA-DRA codifica la cadena HLA-DRα, un componente esencial de los heterodímeros del MHC de clase II que presentan antígenos peptídicos exógenos a los linfocitos T CD4+ y coordinan la activación de la inmunidad adaptativa. HLA-DRα participa en las vías de procesamiento y presentación de antígenos, incluido el tráfico dependiente de la cadena invariante a través de compartimentos endosómicos y la carga de péptidos regulada por HLA-DM, dando forma a la selección de linfocitos T y a las respuestas inmunitarias periféricas. Las variaciones en la expresión o la regulación del MHC de clase II están estrechamente vinculadas a la desregulación inmunitaria y a la patología inflamatoria, con gran relevancia para la autoinmunidad y la inmunobiología del trasplante. La expresión alterada de HLA-DR también se utiliza ampliamente como marcador de los estados de activación de células mieloides y de linfocitos B, lo que aporta información a estudios sobre diferenciación de células inmunitarias y respuestas a la señalización por citocinas.

HLA-DRα El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HLA-DRA sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HLA-DRα El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HLA-DRA en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HLA-DRA, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HLA-DRα. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HLA-DRA y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HLA-DRα en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HLA-DRα en células tumorales con expresión de HLA-DRA silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.