Histone H1X Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-411232

Descripción general

H1FX codifica la histona H1X, una variante de histona enlazadora H1 independiente de la replicación que se une al ADN nucleosomal y contribuye a la compactación de la cromatina de orden superior y a la organización del genoma. Al modular la accesibilidad de la cromatina, H1X influye en programas transcripcionales, en el momento de replicación del ADN y en la coordinación de los procesos de detección y reparación del daño en el ADN. La alteración de la composición de las histonas enlazadoras puede desplazar estados epigenéticos e impactar en vías que regulan el control del ciclo celular, la diferenciación y las respuestas al estrés. La desregulación de la arquitectura de la cromatina y del equilibrio de variantes de histonas se observa con frecuencia en el cáncer y en otras enfermedades con inestabilidad epigenómica, lo que convierte a H1FX en un nodo útil para estudios mecanísticos de las relaciones estructura–función del núcleo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Histone H1X (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen H1FX en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del H1FX junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de H1FX tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Histone H1X.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en H1FX para la investigación de la señalización de Histone H1X, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de H1FX críticos para la función de Histone H1X
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de H1FX para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Histone H1X CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Histone H1X CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus H1FX. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Histone H1X (h) y el plásmido HDR Histone H1X (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología H1FX para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana H1FX definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.