Histone H1X Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-411232

Panoramica

H1FX codifica l’istone H1X, una variante dell’istone linker H1 indipendente dalla replicazione, che si lega al DNA nucleosomiale e contribuisce alla compattazione della cromatina di ordine superiore e all’organizzazione del genoma. Modulando l’accessibilità della cromatina, H1X influenza i programmi trascrizionali, la tempistica della replicazione del DNA e il coordinamento dei processi di rilevamento e riparazione del danno al DNA. Un’alterazione nella composizione degli istoni linker può spostare gli stati epigenetici e influenzare vie che regolano il controllo del ciclo cellulare, la differenziazione e le risposte allo stress. La disregolazione dell’architettura della cromatina e dell’equilibrio tra varianti istoniche è frequentemente osservata nel cancro e in altre malattie caratterizzate da instabilità epigenomica, rendendo H1FX un nodo utile per studi meccanicistici sulle relazioni tra struttura e funzione nucleare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Histone H1X (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene H1FX in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del H1FX insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto H1FX a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Histone H1X.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di H1FX per lo studio della segnalazione di Histone H1X, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni H1FX critici per la funzione di Histone H1X
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di H1FX per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Histone H1X CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Histone H1X CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus H1FX. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Histone H1X Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Histone H1X (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia H1FX per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio H1FX definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.