Histone cluster 1 H1D Plasmide Double Nickase (h): sc-408739-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Histone cluster 1 H1D Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Histone cluster 1 H1D Double Nickase Plasmid (h) e il Histone cluster 1 H1D Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HIST1H1D. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Histone cluster 1 H1D Plasmide Double Nickase (h) | sc-408739-NIC | 20 µg | $410.00 |
HIST1H1D codifica l’istone H1D del cluster 1, un istone linker che si lega al DNA nucleosomico nei siti di ingresso/uscita per favorire la compattazione della cromatina di ordine superiore e regolare l’accessibilità del genoma. Modulando la spaziatura dei nucleosomi e l’organizzazione della fibra di cromatina, H1D influenza i programmi trascrizionali, la tempistica della replicazione del DNA e l’efficienza della segnalazione e riparazione dei danni al DNA. Alterazioni nell’abbondanza o nella distribuzione dell’istone H1 sono associate a disregolazione epigenetica, instabilità genomica e stati di differenziamento aberranti osservati in diversi modelli di cancro e di biologia dello sviluppo. In quanto parte del cluster istonico, HIST1H1D è inoltre rilevante per lo studio dell’assemblaggio della cromatina accoppiato alla replicazione e del rimodellamento della cromatina legato al ciclo cellulare.
Histone cluster 1 H1D Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HIST1H1D nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HIST1H1D. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HIST1H1D. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HIST1H1D interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.