Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Hippi Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-412438
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Hippi Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Hippi, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Hippi Antibody (D-6): sc-390120
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Hippi Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-412438 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
IFT57 codifica un componente centrale del complesso di trasporto intraflagellare B (IFT-B), supportando il traffico anterogrado dei carichi necessari per l’assemblaggio e il mantenimento del ciglio primario. Attraverso il suo ruolo nella ciliogenesi, IFT57 contribuisce a vie di trasduzione del segnale dipendenti dal ciglio, tra cui Hedgehog e altri processi mediati da recettori che coordinano lo sviluppo, la progressione del ciclo cellulare e l’omeostasi tissutale. L’alterazione della funzione di IFT-B è associata a fenotipi legati alle ciliopatie ed è stata implicata in disturbi che interessano la biologia scheletrica, renale e retinica, rendendo IFT57 un bersaglio utile per studi meccanicistici sul trasporto ciliare. Nelle cellule umane, la perdita di IFT57 è comunemente utilizzata per indagare come un’architettura ciliare compromessa rimodelli gli output di segnalazione e il traffico dipendente dagli organelli.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Hippi (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene IFT57 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del IFT57 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto IFT57 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Hippi.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di IFT57 per lo studio della segnalazione di Hippi, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni IFT57 critici per la funzione di Hippi
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di IFT57 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Hippi CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Hippi CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus IFT57. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Hippi Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Hippi (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia IFT57 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio IFT57 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.