HIF PHD2 Plasmide Double Nickase (m): sc-431081-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HIF PHD2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HIF PHD2 Double Nickase Plasmid (m) e il HIF PHD2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Egln1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HIF PHD2 Antibody (H-8): sc-271835
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HIF PHD2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-431081-NIC | 20 µg | $410.00 |
Egln1 del topo codifica la prolil idrossilasi 2 di HIF (HIF PHD2), una diossigenasi dipendente da 2‑ossoglutarato/Fe(II) che, in condizioni di normossia, idrossila le subunità HIF‑α, favorendo l’ubiquitinazione mediata da VHL e la degradazione proteasomiale. Impostando la soglia di rilevamento dell’ossigeno, HIF PHD2 regola programmi trascrizionali indotti dall’ipossia che controllano angiogenesi, eritropoiesi, metabolismo e sopravvivenza cellulare. L’attività di Egln1 interseca la segnalazione HIF‑1/2, la disponibilità di metaboliti legati al ciclo TCA e lo stato redox, rendendola centrale nelle risposte adattative alle variazioni della tensione di ossigeno. La disregolazione di questo asse è rilevante per patologie in cui è alterato l’equilibrio della segnalazione ipossica, incluse il rimodellamento vascolare, fenotipi di eritrocitosi, risposte tissutali legate all’ischemia e la biologia del microambiente tumorale.
HIF PHD2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Egln1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Egln1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Egln1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Egln1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.