HES3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406281

Panoramica

HES3 (hairy and enhancer of split 3) è un repressore trascrizionale della famiglia basic helix–loop–helix che agisce a valle della segnalazione Notch per modulare i programmi di espressione genica che controllano le decisioni sul destino cellulare. Contribuisce al mantenimento di stati indifferenziati e alla regolazione dell’impegno di linea antagonizzando fattori di trascrizione proneurali e associati alla differenziazione, integrando segnali provenienti da vie di sviluppo. Nelle cellule umane, un’attività alterata della famiglia HES è stata associata a differenziazione deregolata, proliferazione aberrante e fenotipi di tipo staminale in contesti rilevanti per la malattia, rendendo HES3 un nodo utile per studiare il controllo trascrizionale dei programmi di sviluppo. I suoi ruoli nelle reti geniche legate al neurosviluppo e ai progenitori supportano lo studio dell’accoppiamento tra segnalazione e trascrizione e della regolazione epigenetica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HES3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HES3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HES3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HES3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HES3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HES3 per lo studio della segnalazione di HES3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HES3 critici per la funzione di HES3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HES3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HES3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HES3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HES3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HES3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HES3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HES3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HES3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.