HES3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406281

Descripción general

HES3 (hairy and enhancer of split 3) es un represor transcripcional de tipo hélice–bucle–hélice (bHLH) que actúa aguas abajo de la señalización de Notch para modular los programas de expresión génica que controlan las decisiones de destino celular. Contribuye al mantenimiento de estados indiferenciados y a la regulación del compromiso de linaje al antagonizar factores de transcripción proneurales y asociados a la diferenciación, integrando señales de vías del desarrollo. En células humanas, la actividad alterada de la familia HES se ha vinculado con una diferenciación desregulada, una proliferación aberrante y fenotipos tipo célula madre en contextos relevantes para enfermedad, lo que convierte a HES3 en un nodo útil para estudiar el control transcripcional de programas del desarrollo. Sus funciones en redes génicas de neurodesarrollo y asociadas a progenitores respaldan la investigación del acoplamiento entre señalización y transcripción, así como de la regulación epigenética.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HES3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HES3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HES3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HES3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HES3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HES3 para la investigación de la señalización de HES3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de HES3 críticos para la función de HES3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HES3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HES3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HES3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HES3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HES3 (h) y el plásmido HDR HES3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HES3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HES3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.