HECTD1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-431500

Panoramica

Hectd1 codifica HECTD1, una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo HECT che catalizza il trasferimento dell’ubiquitina alle proteine substrato per regolarne la stabilità e l’output di segnalazione. Nelle cellule di topo, HECTD1 è stata collegata al controllo del turnover proteico e di vie sensibili allo stress, influenzando l’organizzazione del citoscheletro, la polarità cellulare e i processi che modellano la morfogenesi dei tessuti e la definizione dei pattern di sviluppo. Modulando nodi di segnalazione dipendenti dall’ubiquitina, HECTD1 può incidere su vie che regolano proliferazione, differenziamento e apoptosi. La disregolazione dell’attività delle ligasi dell’ubiquitina è ampiamente rilevante per i meccanismi di malattia che coinvolgono squilibri della proteostasi, segnalazione aberrante e difetti dello sviluppo, rendendo Hectd1 un bersaglio utile per studi meccanicistici nei sistemi dei mammiferi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HECTD1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hectd1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hectd1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hectd1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HECTD1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hectd1 per lo studio della segnalazione di HECTD1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Hectd1 critici per la funzione di HECTD1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hectd1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HECTD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal HECTD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hectd1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HECTD1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR HECTD1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hectd1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hectd1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.