hDcp2 Plasmide Double Nickase (h): sc-418511-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- hDcp2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il hDcp2 Double Nickase Plasmid (h) e il hDcp2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DCP2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
hDcp2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-418511-NIC | 20 µg | $410.00 |
DCP2 codifica l’enzima umano di decapping hDcp2, un componente centrale del turnover dell’mRNA citoplasmatico che catalizza la rimozione del cappuccio 5′ m7G per avviare la degradazione 5′→3′ mediata da XRN1. hDcp2 agisce all’interno di complessi di decapping dell’mRNA e dei P-bodies, integrando segnali provenienti dalla traduzione, dalle risposte allo stress e dal controllo qualità dell’RNA per modulare la dinamica del trascrittoma. Attraverso il controllo della stabilità e della maturazione dell’mRNA, DCP2 influenza vie quali la degradazione mediata da codoni di stop prematuri (nonsense-mediated decay), la repressione mediata da miRNA e l’intercambio tra stress granules e P-bodies. Un’attività di decapping deregolata è stata associata in letteratura ad alterazioni dell’omeostasi dell’RNA e a fenotipi rilevanti per la malattia, inclusi programmi di espressione genica legati al neurosviluppo e al cancro.
hDcp2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DCP2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DCP2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DCP2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DCP2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.