hDcp2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-418511-ACT

Il gene umano **DCP2** codifica **hDcp2**, un enzima di decapping dell’mRNA che rimuove il cappuccio 5′ per avviare la degradazione dell’mRNA 5′→3′, modellando il turnover dei trascritti e la dinamica del proteoma. hDcp2 agisce all’interno dei corpi citoplasmatici di processamento dell’mRNA e interagisce con cofattori del decapping ed esonucleasi per regolare la sorveglianza dell’RNA, l’espressione genica in risposta allo stress e vie di controllo qualità come la degradazione mediata da codoni di stop prematuri (nonsense-mediated decay). Modulando la stabilità di specifici sottoinsiemi di mRNA, DCP2 influenza il controllo del ciclo cellulare, i programmi di differenziamento e gli output della segnalazione infiammatoria. La deregolazione della degradazione dell’mRNA e della dinamica dei corpi di processamento, legata ad un’attività di decapping alterata, è rilevante per meccanismi studiati in biologia del cancro, neurobiologia e interazioni virus–ospite a livello di RNA.

hDcp2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DCP2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

hDcp2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DCP2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DCP2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di hDcp2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DCP2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da hDcp2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via hDcp2 nelle cellule tumorali con espressione di DCP2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.