Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HAUSP Plasmide Double Nickase (m): sc-434244-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HAUSP Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HAUSP Double Nickase Plasmid (m) e il HAUSP Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Usp7. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HAUSP Antibody (H-12): sc-137008
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HAUSP Plasmide Double Nickase (m) | sc-434244-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HAUSP Plasmide Double Nickase (m2) | sc-434244-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse Usp7 codifica la deubiquitinasi HAUSP, una proteasi specifica per l’ubiquitina che regola la stabilità proteica attraverso molteplici reti di segnalazione nucleari. HAUSP modula l’asse p53–MDM2, influisce sulle risposte al danno al DNA e sulla progressione del ciclo cellulare invertendo l’ubiquitinazione di substrati chiave, contribuendo così a plasmare la proteostasi e i programmi trascrizionali. Partecipa inoltre a processi associati alla cromatina ed è stata collegata a vie che governano l’apoptosi, lo stress replicativo e la segnalazione immunitaria tramite la deubiquitinazione di fattori regolatori. Un’attività USP7/HAUSP deregolata è frequentemente studiata nel contesto di difetti dell’integrità del genoma e di reti di segnalazione associate ai tumori, rendendola un nodo utile per studi meccanicistici sul controllo dipendente dall’ubiquitina.
HAUSP Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Usp7 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Usp7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Usp7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Usp7 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.