Gα z Plasmide Double Nickase (h): sc-402241-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Gα z Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Gα z Double Nickase Plasmid (h) e il Gα z Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GNAZ. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Gα z Plasmide Double Nickase (h) | sc-402241-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Gα z Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402241-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GNAZ codifica la subunità umana Gαz, membro della famiglia inibitoria Gi/o delle proteine G eterotrimeriche, che collega i GPCR attivati agli effettori a valle. Gαz modula la segnalazione del cAMP attraverso la regolazione dell’adenilil ciclasi e influenza vie associate a MAPK e PI3K che determinano l’eccitabilità cellulare, la secrezione e le risposte legate alla crescita. In quanto proteina G insensibile alla tossina pertussica e dotata di proprietà biochimiche distinte, è studiata in contesti di segnalazione neuronale ed endocrina, in cui la dinamica dei secondi messaggeri dipendente dal recettore è strettamente controllata. La disregolazione della segnalazione GPCR–proteina G che coinvolge GNAZ è stata esaminata in modelli rilevanti per la malattia di proliferazione aberrante e di neurotrasmissione alterata, a supporto della sua utilità come nodo meccanicistico nella ricerca sulle reti di segnalazione.
Gα z Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GNAZ nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GNAZ. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GNAZ. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GNAZ interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.