GRHL2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-408284-ACT

GRHL2 (fattore di trascrizione grainyhead-like 2) è un fattore di trascrizione umano che si lega al DNA in modo sequenza-specifico e regola la specificazione del destino epiteliale, la differenziazione e la formazione della barriera attraverso il controllo di programmi genici legati alle giunzioni cellula-cellula, alla polarità e al citoscheletro. Influenza la transizione epitelio-mesenchimale (EMT) e le relative reti di segnalazione modulando circuiti trascrizionali associati ad adesione e motilità, contribuendo così a plasmare la morfogenesi e l’omeostasi dei tessuti. Un’attività deregolata di GRHL2 è stata associata ad alterazioni della plasticità epiteliale e a riprogrammazione trascrizionale osservate nella biologia dei tumori e nei disturbi dello sviluppo, rendendolo un nodo utile per lo studio del controllo dello stato epiteliale. La regolazione centrata su GRHL2 è inoltre rilevante nei modelli di riparazione delle ferite, maturazione di organoidi e nei meccanismi che governano l’integrità epiteliale in condizioni di stress.

GRHL2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GRHL2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GRHL2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GRHL2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GRHL2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GRHL2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GRHL2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GRHL2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GRHL2 nelle cellule tumorali con espressione di GRHL2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.