Plásmido Doble Nickase (h) GRB2: sc-400482-NIC

GRB2 codifica la proteína 2 unida al receptor de factores de crecimiento (growth factor receptor-bound protein 2), un adaptador que acopla tirosina quinasas receptoras activadas y receptores inmunitarios con la señalización aguas abajo mediante sus dominios SH2 y SH3. Al vincular receptores que contienen fosfotirosinas con SOS y otros efectores, GRB2 promueve la señalización RAS–RAF–MEK–ERK y se conecta con las vías de PI3K/AKT, la endocitosis y la remodelación del citoesqueleto, que coordinan la proliferación, la diferenciación y la migración. La integración de señales dependiente de GRB2 se examina con frecuencia en estudios sobre la desregulación oncogénica de la vía RTK/RAS, la señalización mitogénica aberrante y el tráfico alterado de receptores. La perturbación de la función de GRB2 también puede influir en la activación de células inmunitarias y en la señalización de respuesta al estrés, lo que la convierte en un nodo común para el mapeo de vías y los análisis de redes a nivel de sistemas.

GRB2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GRB2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GRB2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GRB2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GRB2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.