Plásmido CRISPR de Activación (h) granulysin: sc-403208-ACT

El GNLY humano codifica la granulisina, una proteína efectora citolítica y proinflamatoria almacenada en los gránulos citotóxicos de las células NK y de los linfocitos T CD8+ activados. Tras la formación de la sinapsis inmunológica, la granulisina se libera para potenciar la actividad antimicrobiana y contribuir a la eliminación de la célula diana en conjunto con la perforina y las granzimas, modulando las respuestas inmunitarias innata y adaptativa. La expresión de GNLY se asocia a programas de activación linfocitaria y a estados de diferenciación citotóxica, y su desregulación se estudia en contextos de disfunción inmunitaria, infección crónica, vigilancia inmunitaria antitumoral y mecanismos de enfermedades inflamatorias. Como indicador de la biología de los linfocitos citotóxicos, GNLY se utiliza con frecuencia como marcador y mediador funcional en investigación en inmunología y en interacciones huésped–patógeno.

granulysin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GNLY sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

granulysin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GNLY en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GNLY, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de granulysin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GNLY y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de granulysin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía granulysin en células tumorales con expresión de GNLY silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.