GPRC5B Plasmide Double Nickase (h): sc-409271-NIC

GPRC5B (recettore accoppiato a proteina G, famiglia C gruppo 5 membro B) è una proteina di tipo GPCR orfana, inducibile dall’acido retinoico, arricchita a livello della membrana plasmatica e implicata nella modulazione della segnalazione recettoriale e delle reti di adattatori prossimali alla membrana. È stata collegata alla regolazione della dinamica della segnalazione MAPK/ERK e PI3K/AKT, influenzando la crescita cellulare, la differenziazione e programmi trascrizionali responsivi allo stress. Nei tessuti umani, l’espressione di GPRC5B correla con fenotipi metabolici e infiammatori, e sono state riportate alterazioni della sua regolazione in contesti quali la segnalazione insulinica associata all’obesità, la neuroinfiammazione e la biologia tumorale. In quanto nodo di segnalazione, GPRC5B è spesso studiato per i suoi effetti sul crosstalk tra vie, sul traffico dei recettori e sugli output trascrizionali a valle.

GPRC5B Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GPRC5B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GPRC5B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GPRC5B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GPRC5B interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.