GPR32 Plasmide Double Nickase (h): sc-405309-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GPR32 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GPR32 Double Nickase Plasmid (h) e il GPR32 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GPR32. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GPR32 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405309-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il GPR32 umano codifica un recettore orfano accoppiato a proteine G (GPCR) implicato nel riconoscimento di mediatori lipidici pro‑risolutivi e nel modulare l’ampiezza e la durata delle risposte infiammatorie. Tra i collegamenti di segnalazione riportati figurano la modulazione, guidata da GPCR, delle vie dei secondi messaggeri e dei programmi trascrizionali a valle che influenzano il traffico dei leucociti, la produzione di citochine e gli stati funzionali dei macrofagi. L’attività di GPR32 è stata associata a processi immunitari della fase di risoluzione, intersecando vie che controllano chemiotassi, sopravvivenza cellulare e omeostasi tissutale. Alterazioni dell’espressione o del contesto di segnalazione di GPR32 sono state esplorate in condizioni legate all’infiammazione, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici della regolazione immunitaria.
GPR32 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GPR32 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GPR32. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GPR32. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GPR32 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.