GPR30 Plasmide Double Nickase (h): sc-402502-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GPR30 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GPR30 Double Nickase Plasmid (h) e il GPR30 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GPER1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GPR30 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402502-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR30 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402502-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **GPER1** codifica **GPR30 (GPER)**, un recettore degli estrogeni accoppiato a proteina G associato alla membrana, che media una segnalazione estrogenica rapida e non genomica. Una volta attivato, GPR30 modula vie di secondi messaggeri tra cui cAMP/PKA, la mobilizzazione del calcio intracellulare e le cascate MAPK/ERK e PI3K/AKT, influenzando proliferazione, sopravvivenza e migrazione cellulari, oltre alle risposte infiammatorie. L’attività di GPER1 interseca la transattivazione di EGFR e reti più ampie di segnalazione degli ormoni steroidei, modellando programmi trascrizionali attraverso la segnalazione chinasica a valle. Una deregolazione della segnalazione GPER1/GPR30 è stata implicata in tumori ormono-responsivi, fenotipi cardiovascolari e metabolici e processi immuno-correlati, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sulla segnalazione cellulare e su modelli di malattia.
GPR30 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GPER1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GPER1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GPER1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GPER1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.