GPR126 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407085

Panoramica

ADGRG6 (GPR126) codifica un recettore di adesione accoppiato a proteine G che integra segnali provenienti dalla matrice extracellulare e dai contatti cellula-cellula per regolare la segnalazione mediata da proteine G eterotrimeriche, incluse le vie dipendenti da cAMP/PKA. GPR126 è un regolatore chiave dello sviluppo delle cellule di Schwann e della mielinizzazione e contribuisce alla maturazione dei nervi periferici, con ulteriori ruoli nella biologia della cartilagine, nella crescita scheletrica e nello sviluppo vascolare. Grazie al suo ampio dominio extracellulare e all’autoproteolisi nel sito di proteolisi dei GPCR, GPR126 influenza programmi di segnalazione meccanosensibili e di sviluppo. Alterazioni genetiche e funzionali di ADGRG6 sono state associate a fenotipi neuroevolutivi e muscoloscheletrici, a sostegno della sua rilevanza per lo studio della mielinizzazione, della differenziazione cellulare e della morfogenesi tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR126 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ADGRG6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ADGRG6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ADGRG6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GPR126.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ADGRG6 per lo studio della segnalazione di GPR126, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ADGRG6 critici per la funzione di GPR126
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ADGRG6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GPR126 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GPR126 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ADGRG6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GPR126 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GPR126 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ADGRG6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ADGRG6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.