GP78 Plasmide Double Nickase (m): sc-423842-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GP78 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GP78 Double Nickase Plasmid (m) e il GP78 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Amfr. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GP78 Plasmide Double Nickase (m) | sc-423842-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GP78 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-423842-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Amfr codifica GP78, una ligasi E3 dell’ubiquitina residente nel reticolo endoplasmatico (RE) che agisce come componente chiave della degradazione associata al RE (ERAD), ubiquitinando proteine mal ripiegate o in eccesso per indirizzarle alla degradazione proteasomiale. GP78 coopera con enzimi E2 e con fattori come p97/VCP per coordinare la retrotraslocazione e la rimozione delle proteine client del RE, sostenendo così la proteostasi e limitando l’attivazione delle vie di segnalazione dello stress del RE. Attraverso i suoi ruoli nel controllo qualità dipendente dall’ubiquitina, GP78 influenza vie legate al metabolismo lipidico, all’omeostasi mitocondriale e alle risposte adattative allo stress. La disregolazione dell’ERAD e della segnalazione dell’ubiquitina che coinvolge GP78 è stata associata a processi rilevanti per la malattia, tra cui squilibri metabolici e stress proteotossico, frequentemente studiati nella neurodegenerazione e nella biologia del cancro.
GP78 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Amfr nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Amfr. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Amfr. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Amfr interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.