GM2/GD2 Synthase Plasmide Double Nickase (h): sc-403592-NIC

B4GALNT1 codifica la GM2/GD2 sintasi, una β1,4-N-acetilgalattosaminiltransferasi residente nel Golgi che catalizza la conversione dei gangliosidi derivati dal lattosilceramide in GM2 e GD2, modellando la composizione dei glicosfingolipidi sulla membrana plasmatica. Regolando la biosintesi dei gangliosidi, questo enzima influenza l’organizzazione dei microdomini di membrana, la segnalazione recettoriale e le interazioni cellula–cellula, collegando lo stato di glicosilazione alle vie che controllano l’adesione e la trasduzione del segnale. Profili gangliosidici alterati e l’attività di B4GALNT1 sono stati associati a cambiamenti nello sviluppo neurale e a fenotipi neurodegenerativi, e vengono frequentemente esaminati in contesti in cui il rimodellamento dei glicosfingolipidi influisce sull’identità cellulare e sulle risposte allo stress. In quanto enzima nodo nel metabolismo dei glicolipidi, B4GALNT1 è un bersaglio utile per chiarire come la struttura dei glicani moduli il traffico proteico, il riconoscimento immunitario e la presentazione di antigeni di superficie.

GM2/GD2 Synthase Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus B4GALNT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di B4GALNT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di B4GALNT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con B4GALNT1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.