glypican-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402002-NIC

Il gene umano **GPC1** codifica la **glicipicano-1**, un proteoglicano a eparan solfato ancorato tramite glicosilfosfatidilinositolo (GPI), arricchito sulla superficie cellulare e nelle vescicole extracellulari. La glicipicano-1 lega fattori di crescita e morfogeni con affinità per l’eparina, modulando la segnalazione mediata da recettori tirosin-chinasici e i programmi di sviluppo, inclusi i pathway **FGF**, **VEGF**, **Wnt** e **Hedgehog**, influenzando così proliferazione, adesione, migrazione e organizzazione della matrice extracellulare. Attraverso le sue catene di eparan solfato, determina la disponibilità dei ligandi e i gradienti nel microambiente pericellulare e contribuisce al traffico endocitico e alla regolazione fine dei segnali. Un’espressione o una presentazione di superficie deregolate di **GPC1** sono state associate ad alterazioni della segnalazione nel microambiente tumorale, a comportamenti invasivi e a studi di biomarcatori in molteplici contesti oncologici, supportandone l’impiego nella ricerca oncologica meccanicistica e nella comunicazione cellulare.

glypican-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GPC1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GPC1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GPC1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GPC1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.