glypican-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402002-ACT

Il gene umano **GPC1** codifica **glicano-1**, un proteoglicano a eparan solfato ancorato tramite glicosilfosfatidilinositolo (GPI), localizzato sulla superficie cellulare e in grado di legare diversi fattori di crescita, morfogeni e componenti della matrice extracellulare. Modulando la disponibilità dei ligandi e l’interazione con i recettori, glicano-1 influenza l’output di segnalazione in vie quali **FGF**, **VEGF**, **Wnt**, **Hedgehog** e **TGF-β**, con effetti a valle su proliferazione, adesione, migrazione e programmi angiogenici. Alterazioni dell’espressione di **GPC1** e lo shedding (rilascio) di glicano-1 sono stati associati a cambiamenti nella comunicazione del microambiente tumorale, a fenotipi invasivi e a studi di biomarcatori in molteplici contesti oncologici. Oltre all’oncologia, la regolazione delle interazioni dell’eparan solfato dipendente da glicano-1 è rilevante per i processi di neurosviluppo e per le risposte cellulari a danno e infiammazione.

glypican-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GPC1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

glypican-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GPC1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GPC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di glypican-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GPC1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da glypican-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via glypican-1 nelle cellule tumorali con espressione di GPC1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.