Glutathione Peroxidase 4/GPX4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401558-ACT

GPX4 (glutatione perossidasi 4) codifica una fosfolipide-idroperossidasi selenio-dipendente che riduce gli idroperossidi lipidici di membrana utilizzando il glutatione, mantenendo l’omeostasi redox e preservando l’integrità della membrana. In qualità di soppressore centrale della ferroptosi, GPX4 si integra con il metabolismo del glutatione, il controllo della perossidazione lipidica e le vie di difesa antiossidante, influenzando le risposte allo stress ossidativo associate ai mitocondri e al reticolo endoplasmatico (ER). Un’attività di GPX4 deregolata è stata collegata a una sensibilità alterata al danno ossidativo e alla morte cellulare ferroptotica in contesti che includono la biologia dei tumori, la neurodegenerazione e il danno tissutale infiammatorio. La sua espressione e capacità enzimatica sono quindi ampiamente studiate in modelli di accumulo di ROS lipidiche, morte cellulare ferro-dipendente e segnalazione di adattamento allo stress.

Glutathione Peroxidase 4/GPX4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GPX4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Glutathione Peroxidase 4/GPX4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GPX4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GPX4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Glutathione Peroxidase 4/GPX4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GPX4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Glutathione Peroxidase 4/GPX4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Glutathione Peroxidase 4/GPX4 nelle cellule tumorali con espressione di GPX4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.