Glutathione Peroxidase 3/GPX3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420664

Panoramica

La glutatione perossidasi 3 (Gpx3/GPX3) è un selenoenzima secreto che riduce il perossido di idrogeno e gli idroperossidi organici utilizzando il glutatione, contribuendo all’omeostasi redox extracellulare e limitando il danno ossidativo a proteine e lipidi. Nei tessuti e nel plasma del topo, GPX3 aiuta a tamponare le specie reattive dell’ossigeno e interagisce funzionalmente con il metabolismo del glutatione, le reti di difesa antiossidante e la segnalazione associata all’infiammazione. In letteratura, un’alterata attività di GPX3 è stata collegata a fenotipi da stress ossidativo e a un rimodellamento tissutale disregolato, con effetti a valle sulla funzione endoteliale, sull’attivazione delle cellule immunitarie e su programmi trascrizionali sensibili allo stato redox. Poiché il livello di perossidi extracellulare influenza vie come MAPK e NF-κB, la perturbazione di Gpx3 è spesso utilizzata per indagare la segnalazione regolata dal redox e i modelli di danno ossidativo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Glutathione Peroxidase 3/GPX3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Gpx3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Gpx3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Gpx3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Glutathione Peroxidase 3/GPX3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Gpx3 per lo studio della segnalazione di Glutathione Peroxidase 3/GPX3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Gpx3 critici per la funzione di Glutathione Peroxidase 3/GPX3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Gpx3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Glutathione Peroxidase 3/GPX3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Glutathione Peroxidase 3/GPX3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Gpx3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Glutathione Peroxidase 3/GPX3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Glutathione Peroxidase 3/GPX3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Gpx3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Gpx3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.