Glutathione Peroxidase 3/GPX3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420664

Descripción general

La glutatión peroxidasa 3 (Gpx3/GPX3) es una selenoenzima secretada que reduce el peróxido de hidrógeno y los hidroperóxidos orgánicos utilizando glutatión, contribuyendo a la homeostasis redox extracelular y limitando el daño oxidativo a proteínas y lípidos. En tejidos y plasma de ratón, GPX3 ayuda a amortiguar las especies reactivas de oxígeno y se integra funcionalmente con el metabolismo del glutatión, las redes de defensa antioxidante y la señalización asociada a la inflamación. En la literatura, la alteración de la actividad de GPX3 se ha vinculado a fenotipos de estrés oxidativo y a una remodelación tisular desregulada, con efectos posteriores sobre la función endotelial, la activación de células inmunitarias y programas transcripcionales sensibles al estado redox. Dado que el tono de peróxidos extracelulares influye en vías como MAPK y NF-κB, la perturbación de Gpx3 se utiliza con frecuencia para investigar la señalización regulada por el estado redox y modelos de lesión oxidativa.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Glutathione Peroxidase 3/GPX3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Gpx3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Gpx3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Gpx3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Glutathione Peroxidase 3/GPX3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Gpx3 para la investigación de la señalización de Glutathione Peroxidase 3/GPX3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Gpx3 críticos para la función de Glutathione Peroxidase 3/GPX3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Gpx3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Glutathione Peroxidase 3/GPX3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Glutathione Peroxidase 3/GPX3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Gpx3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Glutathione Peroxidase 3/GPX3 (m) y el plásmido HDR Glutathione Peroxidase 3/GPX3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Gpx3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Gpx3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.