Glutathione Peroxidase 3/GPX3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402413-ACT

Il gene umano **GPX3** codifica la glutatione perossidasi 3, una selenoproteina secreta che riduce il perossido di idrogeno e gli idroperossidi lipidici utilizzando il glutatione, limitando così il danno ossidativo extracellulare. GPX3 contribuisce all’omeostasi redox, alla modulazione della segnalazione infiammatoria e alla protezione dei componenti di membrana e della matrice dalle specie reattive dell’ossigeno, intersecandosi con le reti di risposta allo stress ossidativo e con il metabolismo del glutatione. Un’alterata espressione di GPX3 è stata riportata in contesti associati a uno squilibrio della regolazione redox, inclusi l’oncologia, lo stress metabolico e i processi di rimodellamento vascolare o tissutale, nei quali la capacità antiossidante extracellulare può influenzare la segnalazione e le interazioni tra cellula e microambiente. Queste caratteristiche rendono GPX3 un bersaglio utile per studiare vie regolate dal redox, fenotipi di stress ossidativo e la funzione antiossidante secreta in modelli cellulari umani.

Glutathione Peroxidase 3/GPX3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GPX3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Glutathione Peroxidase 3/GPX3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GPX3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GPX3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Glutathione Peroxidase 3/GPX3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GPX3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Glutathione Peroxidase 3/GPX3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Glutathione Peroxidase 3/GPX3 nelle cellule tumorali con espressione di GPX3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.