GGT5 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405055-ACT

Il gene umano **GGT5** codifica la **gamma‑glutamiltransferasi 5**, un enzima di superficie cellulare che idrolizza il legame gamma‑glutamilico del glutatione e dei coniugati correlati, sostenendo il turnover extracellulare del glutatione e il recupero degli amminoacidi. Attraverso il suo ruolo nel ciclo gamma‑glutamilico, GGT5 contribuisce all’omeostasi redox, alla disponibilità di cisteina e al metabolismo degli intermedi derivati dal glutatione, con effetti a valle sulla segnalazione dello stress ossidativo e sui processi cellulari di detossificazione. L’attività di GGT5 è stata studiata in contesti che coinvolgono microambienti infiammatori, il metabolismo dei lipidi e degli xenobiotici e la regolazione tessuto‑specifica dell’equilibrio ossidativo, rendendola rilevante per vie associate a malattie in cui lo stato redox e la gestione del glutatione risultano alterati. Queste caratteristiche collocano GGT5 come un nodo utile per analizzare come il catabolismo del glutatione influenzi la segnalazione, l’adattamento metabolico e le risposte cellulari allo stress.

GGT5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GGT5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GGT5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GGT5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GGT5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GGT5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GGT5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GGT5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GGT5 nelle cellule tumorali con espressione di GGT5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.