Ggnbp2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-432161-ACT

Il gene murino Ggnbp2 (gametogenetin-binding protein 2) codifica una proteina associata al nucleo implicata nella biologia delle cellule germinali e nella spermatogenesi, con un arricchimento riportato nel testicolo e ruoli collegati alla regolazione della cromatina e al controllo trascrizionale durante la meiosi maschile. La sua attività è rilevante per i programmi cellulari che governano la differenziazione delle cellule germinali, l’integrità del genoma e la maturazione delle spermatidi, processi che dipendono da una riparazione del DNA coordinata e dal rimodellamento epigenetico. La perturbazione dell’espressione di Ggnbp2 è stata associata a difetti nei fenotipi di fertilità maschile in sistemi sperimentali, supportandone l’uso come marcatore e modulatore negli studi di biologia riproduttiva. Di conseguenza, Ggnbp2 è di interesse per indagare le reti regolatorie alla base dello sviluppo della linea germinale e dell’espressione genica specifica del testicolo.

Ggnbp2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Ggnbp2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Ggnbp2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Ggnbp2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Ggnbp2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Ggnbp2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Ggnbp2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Ggnbp2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Ggnbp2 nelle cellule tumorali con espressione di Ggnbp2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.