GDF-15 Plasmide Double Nickase (m): sc-423881-NIC

Il gene murino **Gdf15** codifica il fattore di differenziazione della crescita 15 (GDF-15), una citochina sensibile allo stress appartenente alla superfamiglia del TGF-β, indotta da danno cellulare, disfunzione mitocondriale e segnali infiammatori. GDF-15 può trasmettere segnali attraverso vie associate a SMAD e modulare, in modo dipendente dal contesto, l’attività delle cellule immunitarie, l’omeostasi metabolica e il rimodellamento tissutale. Alterazioni dell’espressione di GDF-15 sono state collegate a fenotipi di stress cardiometabolico, infiammazione associata al cancro e processi neurodegenerativi, rendendolo un utile indicatore molecolare dell’integrazione tra segnali di stress e infiammazione. Nei modelli sperimentali, GDF-15 viene spesso studiato come mediatore delle risposte sistemiche allo stress e come nodo di collegamento tra le vie infiammatorie e il bilancio energetico e i programmi di sopravvivenza cellulare.

GDF-15 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Gdf15 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Gdf15. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Gdf15. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Gdf15 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.