GD3 synthase Plasmide Double Nickase (m): sc-422942-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GD3 synthase Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GD3 synthase Double Nickase Plasmid (m) e il GD3 synthase Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira St8sia1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GD3 Synthase Antibody (B-11): sc-390123
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GD3 synthase Plasmide Double Nickase (m) | sc-422942-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GD3 synthase Plasmide Double Nickase (m2) | sc-422942-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino St8sia1 codifica la GD3 sintasi (ST8SIA1), una sialiltransferasi α2,8 che converte GM3 in GD3 e avvia la biosintesi dei gangliosidi delle serie b e c nel Golgi. Modellando la composizione dei gangliosidi nella membrana plasmatica, la GD3 sintasi influenza l’organizzazione dei lipid raft, la segnalazione recettoriale e i processi a valle, tra cui adesione cellulare, migrazione e differenziamento. L’attività di St8sia1 si colloca all’incrocio tra il metabolismo dei glicosfingolipidi e le vie immunitarie e neurali, in cui i gangliosidi modulano le risposte a fattori di crescita e citochine. Profili gangliosidici alterati che coinvolgono GD3 sono stati associati a segnalazione disregolata e a programmi di stress cellulare rilevanti in sistemi modello neuro-sviluppativi e oncogenici, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici della glicosilazione di membrana.
GD3 synthase Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus St8sia1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di St8sia1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di St8sia1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con St8sia1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.