GBX2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-420503-ACT

Il gene murino **Gbx2** codifica il fattore di trascrizione homeobox **GBX2**, un regolatore chiave della patterning embrionale e dell’identità regionale nel sistema nervoso centrale in sviluppo. GBX2 agisce in programmi trascrizionali che coordinano lo sviluppo del tubo neurale e del rombencefalo, interagendo con reti guidate da morfogeni come le vie di segnalazione **WNT**, **FGF** e **acido retinoico** per stabilire confini antero–posteriori e specificare i lignaggi neuronali. L’alterazione della regolazione genica dipendente da GBX2 è rilevante negli studi sulla disregolazione del neurosviluppo e sulle malformazioni congenite, in cui una formazione dei confini e decisioni di destino cellulare compromesse possono avere conseguenze fenotipiche durature. In contesti adulti e di cellule staminali/progenitrici, GBX2 è utilizzato come marcatore e nodo meccanicistico per investigare traiettorie di differenziamento e gerarchie di fattori di trascrizione.

GBX2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Gbx2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GBX2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Gbx2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Gbx2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GBX2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Gbx2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GBX2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GBX2 nelle cellule tumorali con espressione di Gbx2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.