GBX2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420503-ACT

O gene **Gbx2** de camundongo codifica o fator de transcrição homeobox **GBX2**, um regulador-chave do padrão embrionário e da identidade regional no desenvolvimento do sistema nervoso central. O GBX2 atua em programas transcricionais que coordenam o desenvolvimento do tubo neural e do rombencéfalo, interagindo com redes reguladas por morfógenos, como as vias de sinalização **WNT**, **FGF** e **ácido retinoico**, para estabelecer limites ântero-posteriores e a especificação de linhagens neuronais. A perturbação da regulação gênica dependente de GBX2 é relevante para estudos de desregulação do neurodesenvolvimento e de malformações congênitas, nas quais alterações na formação de fronteiras e nas decisões de destino celular podem ter consequências fenotípicas duradouras. Em contextos adultos e de células-tronco/progenitoras, o GBX2 é utilizado como marcador e como nó mecanístico para investigar trajetórias de diferenciação e hierarquias de fatores de transcrição.

GBX2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Gbx2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GBX2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Gbx2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Gbx2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GBX2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Gbx2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GBX2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GBX2 em células tumorais com expressão de Gbx2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.