GBP1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401778-NIC

La GBP1 umana (guanylate binding protein 1) è una grande GTPasi inducibile dall’interferone che si localizza su membrane intracellulari e in vacuoli contenenti patogeni, dove sostiene l’immunità cellula-autonoma. GBP1 partecipa a programmi guidati da IFN-γ, alla segnalazione dell’immunità innata e alla restrizione antimicrobica tramite oligomerizzazione dipendente dal GTP e reclutamento di meccanismi effettrici a valle. La sua attività interseca vie che controllano la regolazione dell’inflammasoma, le risposte citochiniche e la difesa della barriera epiteliale, rendendo GBP1 un nodo utile per studiare le interazioni ospite–patogeno e l’architettura delle reti infiammatorie. Segnali interferone/GBP1 deregolati sono stati riportati in molteplici contesti di malattie infiammatorie e infettive e sono frequentemente osservati nei microambienti tumorali, supportando la ricerca sulle risposte da stress mediate dal sistema immunitario e sull’infiammazione associata al cancro.

GBP1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GBP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GBP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GBP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GBP1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.