GATA3 Plasmide Double Nickase (h): sc-400134-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GATA3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GATA3 Double Nickase Plasmid (h) e il GATA3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GATA3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GATA3 Antibody (HG3-31): sc-268
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GATA3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400134-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GATA3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400134-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GATA3 codifica un fattore di trascrizione a dita di zinco che si lega ai motivi GATA per controllare la specificazione di linea e i programmi di differenziamento, con ruoli di primo piano nello sviluppo delle cellule T, nella polarizzazione Th2 e nelle decisioni di destino delle cellule epiteliali. Nelle cellule immunitarie, GATA3 coordina l’espressione dei geni delle citochine e il rimodellamento della cromatina per plasmare la segnalazione infiammatoria di tipo 2, mentre nei contesti epiteliali contribuisce al mantenimento degli stati di differenziamento attraverso la regolazione di reti trascrizionali. La perturbazione dei circuiti regolati da GATA3 è stata associata a disregolazione immunitaria e a un differenziamento alterato, rendendolo un nodo ampiamente studiato nel controllo trascrizionale, nell’identità cellulare e nell’espressione genica responsiva agli stimoli. In quanto regolatore nucleare, GATA3 è frequentemente oggetto di indagini in studi sull’utilizzo degli enhancer, sulla cooperatività tra fattori di trascrizione e sulle transizioni di stato cellulare.
GATA3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GATA3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GATA3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GATA3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GATA3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.